国内精品国产三级国产在线专_欧美日韩在线播放一区二区_成人xxxx视频_欧美激情视频一区_色女人综合av_久久久亚洲影院_久久久久久九九_成人免费网站在线_日韩美女毛茸茸_狠狠干一区二区

������  
�����|�ǹ��r�ͺ����늇��F�|�V(ESI-MS)�о�
2004-06-02  ��Դ���|�V����ҌW�g����
�P�I�~��

 

1������

��������ͨ�������������֮�g�����໥���ü��ǹ��r���ö�����ģ���ø�c��������|�c���w�������|�c�����|����ԭ���w���������@Щ���໥���õ�Ӱ푕����¼����İl������ras-GDP(�����|-���w)����-�ɔ_�أ������|-�����|ͬԴ�����w����FKBP-rapamycin�������|-���Ƅ��ͺ��������W�҂����@Щ�������M�ЏV�����о��Ա���õ��˽����w�����������õļ���������ʧ������ʲôԭ������ģ�����Ҫ�����������Ч���A���@Щ�����^�̵ĸ�׃�����µļ�����

��Ҏ���ڙz�y�ǹ��r�ͺ���ķ��������zɫ�V�������x�ġ��t����V����ʾ������V���ɹ���V���@��ɫ�V��X-���w���估�˴Ź���ȡ������и��ă�ȱ�c�����zɫ�V�������x�ġ��t����V����ʾ������V���ɹ���V���@��ɫ�V��ֻ�ܱ����γɏͺ���󵰰��|�ĽY���l����׃�������ṩ���ٻ����ṩ�P�ڷ��������ͺ��ﻯ�WӋ���Y�ϔ�����Ϣ��X-���w����ͺ˴Ź��񷽷������ڜy�������|�����S�Y���������ṩԔ���ĽY����Ϣ���������M�r�͏��s��X-���w����ֻ���ڵõ����m���w����r�²��ܑ��ã����ξ������B�Ǻܲ����׵ġ��˴Ź���������Ø�Ʒ���ܴ��Ҳ��ܷ����������ܴ�ďͺ������40KD�����S�������ܛ��x���g�İlչ���|�V���g�ڵ����|�ǹ��r�ͺ����о������@ʾ��һ����������

����ESI��һ�ܛ��x���g����˺���ʹ�����ѽ�a����Ƭ����˷ǹ��r�ͺ����܉���ESI���о������܉��ڷdz��ӽ���Ȼ��Һ��B����r���о��ͺ���܉�����挍�ط�ӳ�������ӵ�������B����Ŀǰ��ֹ����ESI�^�쵽�IJ�ͬ�ďͺ�����������|-�����|��1,2���������|-���w��3~5���������|-�Ѻ�������6,7���͵����|-�p�DNA��8���������|-�����x�ӏͺ�����9~11������Ҋ��ESI-MS�яV�������о������|�ǹ��r�I�ͺ������������`���ȸߡ����ٺ��|�����_�ȸߵă��c���Y����Ļ��WӋ�����܉�����׵؏ķ������ƌ�����ͨ�^��׃Cone늉�����׃pHֵ��ë���ܜضȣ����Ա��^��ͬ�������c�����|���H�����Ĵ�С��12����ͨ�^�c����ø�����ȫø����Y�ϣ�߀���Դ_��С�����c�����|�ĽY��λ�c��13������֮������ESI �о������|�ͺ����܉��ژ�Ʒ�����٣�Ƥ��Ħ������Ƥ��Ħ���������ٵ���r�µõ��ɿ��Ĕ������^�����Ϣ��

����ESI���S�����c������һ������������ڰlչ�|�V�������о��������ӷǹ��r�ͺ���Ա㌤��һ�N�������������IJ����ǏĺϳɵĻ���Ȼ���YԴ�кY�x�܉��c�²����׷ǹ��r�I�Y�ϵ����Ƅ����Ա�����A�²��C����12����ԓ�������1990���_ʼԓ�Ŀ�ԁ�������ESI�о���ras-���׺������wGDP(14)��GTP��15���ķǹ��r�໥���á�������Ĺ����У�������ESI�z�y����ras-GDP���ЙC���Ƅ�SCH54292��SCH54341����Ԫ�ͺ������Ԫ�ͺ���ras-GDP-SCH54292���о��У�����߀�_����ˎ���ras���׵ĽY��λ�c���������о����Կ�����ESI-MS�����о������|�ǹ��r�I�ͺ���Ĺ��ߣ����кܺõđ���ǰ����

2��늇��F�|�V(ESI-MS)�Ļ���ԭ��

ESI����ë���ܵij���̎ʩ��һ��늉������a���ĸ�늈�ʹ��ë����������Һ�w�F���ɼ�С�Ď��Һ�Σ��S���܄����l��Һ�α���e�sС�����·������Ԇ�늺ɻ��늺��x�ӵ���ʽ�M����ࡣ늇��F�x�ӻ������c�Ǯa����늺��x�Ӷ�������Ƭ�x�ӣ�ʹ�|��늺ɱȽ��͵������|�������x�����ԙz�y�ķ�����������U���˷������ķ����������x�ӵ��挍���������Ը����|�ɱȼ�����늺ɔ�Ӌ�����һ����Ӌ��Cܛ����ɡ�늇��F�|�V�������������}�;��_Һ�����}�;��_Һ�Ĵ��ڕ�ʹ�x�����`���Ƚ��͡�늇��F�|�V�ă��c�������Է�����c��N���x���g“�ã���Һ�|“�ú�ë�����Ӿ-�|�V“�õȡ�

3��늇��F�|�V(ESI-MS)�о������|�ǹ��r�ͺ���Č��l��

 늇��F�|�V�о������|�ǹ��r�I�ͺ���ɹ����P�I�l���Ǻܺõ�������{���x�������͘�Ʒ�Ƃ䡣һ����r����늇��F�|�V�о������|����ĵ����`��������l�������m���ڵ����|�ǹ��r�I�ͺ�����о���ͨ������늇��F�|�V�о������|�r����Ʒ���ں�1%HCOOH ��1%HOAc�ĺ�һ�����������״���ˮ��Һ�С��@�ӵėl���������|�γɷǹ��r�I�ͺ����Dz����ģ����Ɖķǹ��r�I���γɡ��ڽӽ�����pH�r�������|��������Ȼ�Ļ��Ԙ��󣬲����γɷǹ��r�I�ͺ����ˣ��о������|�ǹ��r�I�ͺ���r����Ʒ������2-50mM NH4Oac��NH4HCO3�У�pH��5-8֮�g���^���m��ë���ܜضȻ�늇��FԴ�صĸߵ͌������|�ǹ��r�I�ͺ���Ҳ��Ӱ푡����܉�ʹ��Ʒ�x�ӻ��ėl���£��ض�Խ��Խ�á�늇��F��≺�����֮�g��늉���Cone늉����ͺ���Ҳ�кܴ��Ӱ푣�늉��ߕr�����ͺ���Ľ��x����֮�������܉��µ����|׃�Ե����ض������ڵ����|�ǹ��r�I�ͺ�����γɡ�PHֵ���ЙC�܄����ضȺ�늉������о������|�ǹ��r�I�ͺ���rҪ���]�Ďׂ���Ҫ���ء���늇��F�|�V�о������|�ǹ��r�I�ͺ���ķ�����Ҳ������ͨ�^��׃�@�ׂ��l���팍�F�ġ�

4��늇��F�|�V(ESI-MS)�ڵ����|�ǹ��r�ͺ����о��еđ�������

��1991��Ganem���� �����瑪��늇��F�|�V�о������|FKBP12 �������wFK506 ��rapamycin �ķǹ��r�I�ͺ����ԁ���ԓ���g�ͱ�Խ��Խ��ČW�������á�Smith ��Zhang������Loo()��Pramnik�ȣ������^�l���˺ܺ��в�ͬ�����c�ľC�������˃H�e�ׂ������������f��늇��F�|�V�ڵ����|�ǹ��r�I�ͺ����еďV�����ü��䃞Խ�ԡ�

A. �����|-�����|�໥����

늇��F�|�V���о������|�ļ��Y�������@ʾ���˾޴�������������|�ͺ�����ͬԴ�ͮ�Դ�ɷN���|�V�����|���IJ�e���ԅ^���@�ɷN�ͺ��Brookhaven protein databank  Brookhaven �����|����������е����|�У�33%���γ��˶���w�ͺ��a1�������@Щ�ͺ����У�80%���γ��˶����w���ľ��w��늇��F�|�V�dz��m�����b�������|�ā�����Ŀ��

Loo(a2)�Ȉ����HIV����øͻ׃�wIN F185KͬԴ�����w��늇��F�|�V�о���HIV����ø��HIV���������^������dz���Ҫ�����ã��п��ܳɞ�һ���µĿ����̲�ˎ��İ��c(a3)������HIV����ø���ܽ�Ⱥ�С����˲��׸������Ę���IN F185K������һ��ͻ׃�w���ܽ�����󣬵���Ӱ�����ԡ��о�������HIV����ø�Զ����w����ʽ�����ã��c���w�Y����һ�µģ�a4-6������pH2.5����Һ�У����棺ˮ=2:1v/v, ��3%���ᣩ��IN F185KIN F185K��늇��F�|�V�D�dž��w�Ķ�늺ɷ壬����늺ɏ�+12��+22����11����늺ɷ塣�D�Q��ķ�������18172.0�������Լ����ЙC�܄�������ڵėl���£�IN F185K�ص�׃�ԣ�ʹ���������о}�԰����ᶼ��¶���펧���|�ӣ�����γ�����ߎ�+22��늺ɵ�11����늺ɷ塣��pH6.5��10mM�����ᰱ��Һ�У�IN F185K��늇��F�|�V�D�Ƕ����w�Ķ�늺ɷ壬��m/z3000�����γ���������늺ɷ壬�������늺ɞ�+13���D�Q��ķ�������36345.9����pH6.5��10mM�����ᰱ��Һ�У�IN F185K��������Ȼ�Ļ��Ԙ����γɽY���o�ܵĶ����w��ֻ�б�¶�ڷ��ӱ���IJ��־}�԰�������܉����|�ӣ���˃H��������늺ɷ塣����IN F185K�ĝ�ȣ����]���^�쵽�������خ��ԵĶ���w������≺����սӿڵ�늉���50 ���ӵ�140�������w�t�������w��

B.  �����|�����w

Schwartz(b1)����늇��F�|�V�о��˃ɂ�С�������w�����أ�������244���́����������أ�������243����һ�����Ă������M�ɵĴ󵰰���H���غ���core streptavidin ��������53084���ķǹ��r�I�Y���О顣��H����Streptavidin ���H����һ�ӣ��c�������ɺ��خ����܏����H������Kd=10-15M��,�@ʹ���@һǹ��r�I�ͺ��������ﻯ�W�ͷ�������W�����������߻��W���H�ͷ��x�еđ��÷dz��ďV����b2-5�������́��������ص��H����������Kd=10-7M���������w����H���غ����ܽ���pH8.6 10mM�����ᰱ��Һ�У����w�͵��� ��H���غ���core streptavidin��Ħ����ȱȞ�7:1������ͬ�Č��l�����M��늇��F�|�V�������Y���������c��֪����Һ�еĽY��һ�£������غ���H���غ����ľ��w�γ���4:1�ķǹ��r�I�ͺ�������������غ���H���غ��ě]���γɏͺ��ֻ���ڃx������l���O��غͣ����w��ȸ��ߺͷ����r�g���L�r���в��ց��������غ���H���غ��ĽY�ϣ����Y�ϲ�����ȫ�������ß��T���ѽ�߀�о������w����H���غ��ķǹ��r�I�ͺ���ķ����ԣ�ë���ܜض����ߕr���ͺ����ѽ⣬���ֵ����|�ľ��wҲ���x����w������߀��ؓ�x��늇��F�|�V�о��������ػ��ĹѺ��������H���غ��ĵķǹ��r�I�Y�ϡ��c��Һ�е��О�һ�£��Ѻ��������H���غ��Ļ��W�Y��Ӌ���Ȟ�4:1��ԓ���Y����������늇��F�|�V�о�����ӵ��׺�С�������w�໥���õĽY������Һ�е��О���һ�µģ����`�����ʴ_�����٣��кܺõđ���ǰ����

 

  C.  ø�����Ƅ�

   HIV-1����ø���춬���ᵰ��ø�����һ���ɆT��ԓ����ɆT����ľ��ø���I�ء�����ø���M������øD��(c1)��HIV����ø��һ�Եش߻����� gag��gag-pol�D䛮a��a���b�䲡���w������Ҫ��ø�ͽY�������|��HIV-1����ø������pH6�r��ߣ��������w���x������ø���Ե���ȫɢʧ��θ����ø���Ƅ�A�� isovaleryl-Val-Val-Sta-Ala-Sta, Mr686�����춬���ᵰ��ø���خ������Ƅ�(c2-3)��HIV-1����ø�Ļ���λ�c�Ѓɂ���������ͬ���ֽM�ɡ����Ƅ���ø�ķ����К��I����ˮ���ù�ͬ�����á�

Loo(a2)����늇��F�|�V�о���θ����ø���Ƅ�A��HIV-1����ø�ĽY���cpHֵ���Pϵ����pH2.5��2.5% ������Һ�����棺ˮ=2��1���У�ֻ��HIV-1����ø���w�Ķ�늺ɷ塣�������늺ɔ���13����6����늺ɷ塣��θ����ø���Ƅ�A��HIV-1����ø�����ᰱ����Һ��Ϻ��������ˮ�{����Һ��pHֵ���y����늇��F�|�V�D����pH4.7-6.9����Һ���^�쵽��θ����ø���Ƅ�A��HIV-1����ø�����w����Ԫ�ͺ��ͬ�r��HIV-1����ø�����w�͆��w�Ĵ��ڡ�ø�c���Ƅ�����Ԫ�ͺ����� pH5.5-6.0�r�����ԓ�Y���c��ǰBaca and Kent(c4) ����ĽY��һ�¡�ø�c���Ƅ�����Ԫ�ͺ��늇��F�|�V�Ĵ�≺��սӿڗl�������У��ڵ͵� Vts(10V)�͵�ë���ܜضȕr��175����Ԫ�ͺ�����S����ߡ����ë���ܜضȕ�ʹ��Ԫ�ͺ��オ�⡣

D. ��ԭ-���w����

��늇��F�|�V�о���ԭ���w�໥���ò��H�`�����ʴ_�����٣��cø����Y��߀���Դ_����ԭ��λ�����w���aλ��MILLAR(d1) ����늇��F�|�Vֱ�әz�y����һ���µ��܉�����HIV-I���Ե���17��������M�ɵ�΢���w�� MicroAb���ʹ���İ�����clade B���ͷ���(clade A)���x���ĵ�һ�� HIV-1����V3�^����(V3��)���໥���á�ԓ΢���w�� MicroAb����һ�����خ��Ե��cHIV-1��Ĥ�ǵ���gp120V3 �h��^���õ���ο�IGGI(F58)����朵����a�w�^��CDR-H3����һ����(d2)�����Ļ��Ա�F58�ĸ�5������MicroAb��V3���ܽ���pH7.0��50mM�����ᰱ��Һ�У�ʹ��ȷքe��500ug/ml��37������1С�r���M��늇��F�|�V�y�����^�쵽��MicroAb��V3�ĵďͺ����ͬ�r����δ�Y��MicroAb��V3�ģ��ҏͺ�����S�������^�͡����������õ��dҺ�����棺ˮ=1��1����0.1%���ᣩ������m�������ڏͺ�����γɡ��Y������MicroAb��ͨ�^�c�����w��ֱ�ӽY�϶��錧����ʧ��ġ�

��V3�����ȵ���ø�M����ȫø�⣨37�� 1С�r���Ͳ���ø�⣨4�� 2��犣���Ȼ��ø���Ķκ�MicroAb��Ϻ���37������1С�r���M��늇��F�|�V�y�����Y������ֻ�в����Ķ��cMicroAb�Y�ϡ�ͨ�^���^�cMicroAb�Y���Ķε����м��Mһ���о����C��MicroAb�Ŀ�ԭ��λ��RKSIXIGPGR��

ԓ���Y���f����늇��F�|�V�о���Һ�п�ԭ-���w�������`�������١��ʴ_�ķ�����

E. �����|�͹Ѻ�����

�����|��DNA���໥�����漰�������^�̵��S�෽�棬��˾�����Ҫ�����x�����W�Y��Ӌ���ǵ����|��DNA�໥���õ�һ����Ҫ���ԡ���һ����Ʒ�к��в�ͬ�Ļ��W�Y��Ӌ������Y�Ϻ��������e��С�r�����W�Y��Ӌ���Ĝy���͸������y(e1)��늇��F�|�V���ھ��и��`���Ⱥ͸��|���ʴ_�ȵă��c����˿��Ժܜʴ_�Ĝy���仯�W�Y��Ӌ����

Cheng(e2)����늇��F�|�V�о��ˏļ����ɾ��w���x��geneV���׺ׂ͎��Ѻ�����Ļ��W�Y��Ӌ���������ɾ��w�ď����^����Gene V �����𷀶����DNA(ssDNA)�����ã������ϳɵ��ɾ��wDNA���p��D׃���朡���֪geneV����������l������Ҫ�Զ����w���ڣ�Kd~-12 M����pH7.0 10mM���ᰱ��Һ�У��oՓ�����x��߀��ؓ�x��늇��F�|�V��geneV���׶���Ҫ�Զ����w���ڡ���ؓ�x�ӗl���£��γ����������늺ɞ�-8���Ă���늺ɷ塣��pH3.0 50mM������Һ�У��γ�����ߎ�+14늺ɵ�11����늺ɷ塣�@�c���µ����|׃�ԵĽY��һ�¡�

����ͬ��ȱȵ�geneV���׺�16mer�ĹѺ�������pH7.0 10-50mM�����ᰱ�з���10��犺��M��늇��F�|�V�������Y������gene V���׺�16mer �Ѻ���������γɲ�ͬ���W�Y��Ӌ���ķǹ��r�I�ͺ����Ҫ��4:1(gene V :16mer I), ���Ѻ������^���r��������2:1�ďͺ�����ڡ�

����ͬ�r��늇��F�|�V�о���gene V���׺� d (pT)13 ��d (pT)15�� d (pT)18����ͬԴ�Ѻ�����Ļ��WӋ���Y�ϔ�����gene V���׵�Ħ����Ⱥ� d (pT)13 ��d (pT)15�� d (pT)18�����Ŀ�Ħ����ȱȞ�1:1 �r�� d (pT)18 ��Ҫ�γ�4:1�ďͺ����d (pT)13 ��d (pT)15��Ҫ�γ�2:1�ďͺ����gene V���׵�Ħ����Ⱥ� d (pT)13 ��d (pT)15�� d (pT)18�����Ŀ�Ħ����ȱȞ�2:1�r��d (pT)18 ��d (pT)15�γ�4:1�ďͺ����d (pT)13���γ�2:1�ďͺ���f��gene V���׺�d (pT)13����Ҫ���W�Y��Ӌ������2:1����d (pT)18�Ğ�4:1,����d (pT)15�Ļ��W�Y��Ӌ�����t�����Ѻ������gene V���׵�������Ȳ�ͬ��4:1��2:1��

���īI���gene V�����cpoly(dA)��poly(dT)���H�������ɂ���������������늇��F�|�VҲ�õ�����ͬ�ĽYՓ����gene V���׺�d (pT)13 ��d (pA)14�Ļ����

��pH 7.0 10mM���ᰱ��Һ���M��늇��F�|�V��������d (pT)13��d (pA)14Ħ�������ͬ�r����Ҫ��gene V���׺�d (pT)13 �γɵ�2:1�ķǹ��r�I�ͺ���׺��]��gene V���׺�d (pA)14�γɵďͺ����ֻ��d (pA)14 �r��gene V���׺�d (pA)14���Ժ������γ�2:1�ďͺ����d (pT)13��d (pA)14Ħ����Ȟ�2:100�r��gene V���׺�d (pT)13 �γɵ�2:1�ͺ�����S����gene V���׺�d (pA)14�γɵ�2:1�ͺ����8�����͝��һ�𿼑]���tgene V���׺�d (pT)13���H�����Ǻ�d (pA)14�H������400����

��Ҋ��늇��F�|�V���о������|��DNA �໥���Õr�о޴�ă�Խ�ԡ�

F. �����x�Ӻ���

�����x�����S�������^�̶������dz���Ҫ�����á�����ͨ�^�|�l�C���������Y������������߀ԭ�����������á������еĶ��r�����x���У��}�x�ӵ����������Ҫ�������ڼ���Ĥ����ĝ�Ȳ�}�x�����{�������^���г��䮔�ڶ���ʹ�����á����{���������^�̳��漰�}�Y�ϵ����|��f1-5����Veenstra(f6)����늇��F�|�V�о����}�{���׺̓ɂ��ĵķǹ��r�I�ͺ��һ�������}�{����ه�ĵ���øII���}�{�ؽY�υ^��һ���Ƕ����ġ�ֻ�����}�x�Ӵ��ڕr���}�{�غ̓ɂ��ļ��}�x���γ�1:1:4(�}�{�أ��ģ��}�x��)����Ԫ�ͺ��ͬ�r����߀�C����Ԫ�ͺ���ķ������c늇��F�|�V��Դ�����P�� Nemirovskiy (f7)���ô�“�|�V��FAB��ESI���о������ü��}���׵��}�x�ӽY��λԪ�cIII��ģ�͵�һϵ��С�ĺ��}�x�ӏͺ���ĸ��ܺ͵�����ײ��ѽ��О顣늇��F�|�V�Юa�����}�x��/�Ķ���Ƭ���}�x�ӽY�Ͽ��ƣ��ṩ���}�x�ӽY��λ�c����Ϣ�������}�x�ӽY��λ�c�漰��һ���춬���ᡢһ���Ȱ����һ���Ȱ���������ԭ���Z���|�V�Юa�����Ķ�ʮ�֏��s�����׽�����

Hu and Loo(f8)��늇��F�|�V�о���С�׵��׺��}�{���c�}�x�ӵĻ��W�Y��Ӌ��������fͬ�Pϵ���о��l�FС�׵��׵ăɂ��}�x�ӽY��λ�c�c�}�x�ӵĽY���к܏��ąfͬ�ԡ����}�x�ӝ�ȸߕr���}�{�ؿ��Ժ��Ă��}�x�ӽY�ϡ��������}�x�Ӻ͵��Ă��}�x���c�}�{�صĽY���к܏��ąfͬ�ԡ��}�{�ط������c�}�x�ӽY�ϵăɲ���Ҳ�к܏����໥���á�

 

 

 

5���YՓ

 

�����īI��

1��Ogorzalekloo, R. R.; Goodlett, D. R.; Smith, R. D.; Loo, J. A.

   J. Am. Chem. Soc. 1993, 115, 4391

2.        Goodlett, D. R.; Smith, R. D. J. Am. Soc. Mass Spectrom. 1994, 5, 614

3.        Robinson, C. V.; Chung, E. W.; Kragelend, B. B.; Knudsen, J.; Aplin, R. T.; Poulsen, F. M.; Dodson, C. M. J. Am. Chem. Soc. 1996, 118, 8646

4.        Haas, T. A.; Plow, E. F. J. Biol. Chem. 1996, 271, 6017

5.        Veenstra, T. D.; Tohnson, K. L.; Tomlinson, A . J.; Naylor, S.; Kumar, R. Biochemistry  1997, 36, 3535

6.  Light-Wahl, K. J.; Springer, D. L.;Winger, B. E.; Edmonds, C. G.; Camp, D.                 G. 2d; Thrall, B. D.; Smith, R. D. J. Am. Chem. Soc. 1993, 115, 4391

7        Goodlett, D. R.; Camp, D. G. 2d; Hardin, C. C.; Corregan, M.; Smith, R. D.

Biol. Mass Spectrom. 1993, 22, 181

8.        Cheng, X. H. ;Morin, P. E.; Harms, A. C.; Bruce, J. E.; Ben-David, Y. ; Smith, R. D. Anal. Biochem. 1996, 239, 35

9.        Veenstra, T. D.; Tomlinson, A. J.; Benson, L.; Kumar, R.; Naylor, S. J. Am. Soc. Mass Spectrom. 1998, 9, 580

10.    Mirza, U. A.; Liu, Y. H.; Ramanathan, L.; Heimark, L.; Pramanik, B.; Malcolm, B.; Weber, P.; Ganguly, A. K. The 46 th ASMS Conference on Mass Spectrometry and Allied Topics; Orlando, FL, May 31-June4, 1998, 991

11.    Whittal, R. M.; Ball, H. L.; Burlingame, A. L.; Prusiner, S. B.; Baldwin, M. A.; The 46 th ASMS Conference on Mass Spectrometry and Allied Topics; Orlando, FL, May 31-June4, 1998, 990

12.    Pramanik, B. N.; Bartner, P. L.; Mirza, U. A.; Liu, Y. H.; Ganguly, A. K.;

   J. Mass Spectrom. 1998, 33, 911

13

14        Ganguly, A. K.; pramanik, B. N.; Tsarbopoulos, A.; Covey, T. R.; Huang, E. C.; Fuhrman, S. A. J. Am. Chem. Soc. 1992, 114, 6559

15        Ganguly, A. K.; pramanik, B. N.; Huang, E.C.; Tsarbopoulos, A.; Girijavallabhan, V. M.; Liberles, S. Tetrahedron. 1993,49,7985

A.1. Jones, S.; Thornton, J. M. �� Principles of protein-protein interactions,�� Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1996,93,13-20

2. Loo, J. A.; Holler, T. P.; Foltin, S. K.; Mcconnell, P.; Banotai, C. A.; Horne, N. M.; Mueller, W. T.; Stevenson, T. I.; Mueller, W. T.; Stevenson, T. I.; Mack, D. P. Proteins 1998, suppl. 2: 28

3. Thomas, M., Brady, L. HIV integrase: a target for AIDS therapeutics. Trends Biotechnol. 1997, 15, 167-172

4. Dyda, F., Hickman, A.B., Jenkins, T.M., Engelman, A., Craigie, R., Davies, D.R. Crystal structure of the catalytic domain of HIV-1 integrase: similarity to other polynucleotidyl transferases. Science. 1994, 266, 1981-1986

5. Hickman, A.B., Palmer, I., Engelman, A., Craigie, R., Wingfield, P. Biophysical and enzymatic properties of the catalytic domain of HIV-1 integrase. J. Biol. Chem. 1994, 269, 29279-29287

6. Jenkins, T. M., Engelman, A., Ghirlando, R., Craigie, R., A soluble active mutant of HIV-1 intgrase. Involvement of both the core and carboxyl-terminal domains in multimerization. J. Biol. Chem. 1996, 271, 7712-7718

 

B. 1. Brenda L. Schwartz, David C, Gale and Richard D. Smith, Investigation of non-covalent ligand binding to the streptavidin tetramer by electrospray ionization mass spectrometry.  J. Mass Spectrom. 1995, 30, 1095-1102

   2. N. M.. Green, Biochem. J. 1966, 101, 774

   3. N. M.. Green, Adv. Protein Chem. 1975, 29, 85

   4. M. Wilchek and E. A. Bayer, Anal. Biochem. 1988, 171, 1

   5. E. A. Bayer, and  M. Wilchek, J. Chromatogr. 1990, 510, 3

C. 1. Wlodawer, A., Miller, M., Jaskolski, M., et al. Conserved folding in retroviral proteases: Crystal structure of a synthenic HIV-1 protease. Science. 1989, 245, 616-621

   2. Huff, J. R. HIV protease : a noval chemotherapeutic target for AIDS. J. Med. Chem. 1991, 34, 2305-2327

   3. Wlodawer, A., Erickson, J. W. Structure �Cbased inhibitors of HIV-1 protease. Annu. Rev. Biochem. 1993, 62, 543-585

   4. Baca, M., Kent, S. B. H.  Direct observation of a ternary complex between the dimeric enzyme HIV-1 protease and a substrate-based inhibitor. J. Am. Chem. Soc. 1992, 114, 3992-3993

D. 1. Alan L. Miller, Nicholas A. C. Jackson, Howard Dalton, Keith R. Jennings, Michael Levi, Britta Wahren and Nigel J. Dimmock. Rapid analysis of epitope-paratope interactions between HIV-1 and a 17-amino-acid neutralizing microantibody by electrospray ionization mass spectrometry. Eur. J. Biochem. 1998, 258, 164-169 (FEBS 1998)

 2. Levi, M., Sallberg, M., Ruden, U., Herlyn, D., Maruyama, H., Wigzell, H., Marks, J. & Wahren, B. A complementarity-determining region synthetic peptide acts as a miniantibody and neutralizes human immunodeficiency virus type I in vitro, Proc. Natl. Acad. Sci. USA.1993, 90, 4374-4378

E

1. Cantor, C. R. & Schimmel, P. R. Techniques for the study of Biological Structure and Function. 1980, Freeman, New york

2. Xueheng Cheng, Amy C. Harmes, Paul N. Goudreau, Thomas C. Terwilliger and Richard D. Smith. Direct measurement of oligonucleotide binding stoichiometry of gene V protein by mass spectrometry. Proc. Natl. Acad. Sci. USA (Biophysics) 1996, 93, 7022-7027

F. 1. Baker, W. C., Ketcham, L. K., Dayhoff, M. O. In Atlas of Protein Squence and Structure, Vol. 5; Dayhoff, M. O., ED.; National Biomedical Research Foundation: Silver Spring, MD, 1965, pp 13-50.

2. Vogt, H. P.; Strassburger, W.; Wollmer, A.; Fleischhauer, J.; Bullard, B.; Mercola, D. J. Theor. Biol. 1979, 76, 297-310

3. Reid, R. E.; Hodges, R. S. J. Theor. Biol. 1980, 84,401-444

4. Gariepy, J.; Hodges, R. S. FEBS Lett. 1983, 160, 1-6

5. Grivici, A.; Ikura, M. Annu. Rev. Biophys. Struct. 1995, 24, 85-116

6. Timothy D. Veenstra, Andy J. Tomlinson, Linda Benson, Rajiv Kumar, and Stephen Naylor .  J. Am. Soc. Mass. Spectrom. 1998, 9, 580-584

7. Olga V. Nemirovskiy and Michael L. Gross.  J. Am. Soc. Mass. Spectrom. 1998, 9, 1020-1028

8. Peifeng Hu and Joesph A. Loo. J. Mass. Spectrum. 1995, 30, 1076-1082

 

����c��؟•�������W퓵ă������Ї��ۺ���W�ռ���“�W�ϰl������Ϣ�����@�á�Ŀ�����ڂ��f��Ϣ��������������ζ��ٝͬ���^�c���C�����挍�ԣ�Ҳ�������������h���H�ṩ����ƽ�_����������ؓ؟�����漰�֙࣬Ո“ϵ�҂����r�޸Ļ�h�����]�䣺[email protected]��δ�����Wͬ�ⲻ��ȫ���D�d��ժ��������������ʽʹ��������Ʒ��
���� �� С������ӡ�����P�]��
���P��„
  • ���o���P��„

�\���Pע�߷��ӿƼ�

ȺӢ�����Г��Ŀ
����>>�ƽ���„
国内精品国产三级国产在线专_欧美日韩在线播放一区二区_成人xxxx视频_欧美激情视频一区_色女人综合av_久久久亚洲影院_久久久久久九九_成人免费网站在线_日韩美女毛茸茸_狠狠干一区二区
�պ���Ƶר��| caoporn������Ʒ��ѹ���| ������Ļ�պ�һ����������| ŷ���պ����߾�Ʒ| ������Ʒ��Ů���߹ۿ�| ���������Ƶ��վ| �ձ��������߲���| �����׾�Ʒһ������������Ƶ���| ���ݹ�����Ʒ�þþ�| ��Ʒ����һ��������| ������Ʒ6699| ��ŷ������xxxx�����߹ۿ�| ������ҹ��Ʒ����| ������Ʒ˿��þþþþø���| ���߹ۿ��պ�������Ƶ| �þþþþþþþþ���Ѿ�Ʒ| �����������ۺ�| �þþ�Ʒ99| ����һ������������������| ����һ���������߹ۿ�| ����������Ƶ��ַ| ŷ����Ʒһ���������������ļ� | �þ��ۺϾþþ�| ����av��Դ��| 68��Ʒ������Ѿþþþþ�����| ŷ������һ������| ŷ��һ����Ƭ��Ƶ| ���޹���һ����������| ����С˵�ۺ���| �ٸ����ëƬ�þþþþþþ� | 91����va����va����va�� | 91��Ʒ���˾þ�| ɫ�����ۺ���| ŷ��һ��������������| ������Ѿþ�av| �ۺϲپþþ�| ������Ʒһ�������þù���| ���þþ������һ������| ŷ������һ����������������Ƶ | �պ����ߵ�Ӱһ��| �պ�avëƬ��| ������Ʒ��Ƶ����| �ձ���ҹ��Ʒ��Ӱ| ���޸���123| ����a�����˵��������߹ۿ� | ���Ҵ�ý��Ƶ��һ��������߿�| �պ�av������߲���| ����ݳ�������| 91�ֻ�������Ƶ| ���޹�����ƷëƬ| һ������������������| ������Ʒ��վ��Ƶ| 97se�����ۺ�| ������Ʒ��Ƶ�þþþ�| �й�������ɫ�ۺ���վ| ��Ʒ�ձ�һ������| ���������þþ�| ��Ʒһ���þþ�| 99�þ���ɫ��| ŷ�������ϸ�����������| �����˳���77777�߹ۿ�| ŷ������������Ļ�������| �ձ�����ŷ��ɫ��| ����������Ʒ��������| �ձ��þþ�a�����| �������˾�Ʒ���޾�Ʒ| ������Ʒjizzhdŷ��| ͵����Ƶһ������| �þ��ۺ������ۺ�| һ���պ�һ�����߹ۿ�| 99porn��Ƶ����| �պ���Ʒ��Ƭ| ŷ������һ����������������Ƶ�ۿ�| һ��һ����Ƶ| 1769���ھ�Ʒ��Ƶ���߲���| �����պ��������| ������Ʒ���޹�˾| 91���������Ƶ| �պ�Ů���߹ۿ�| ��͵�þþþþþ�͵Ů��| 91�������ߵ�Ӱ| ������Ʒ��Ƶ�������| һ����������Ƶ| ����ԭ����Ʒ| 91��Ƶ8mav| ��Ʒ��ҹһ������| �պ����ߵ�Ӱһ��| ��������ŷ��һ������ | ŷ����ҹ��Ʒ�þþ�| ������Ʒ�۲����߹ۿ�| լ������99������Ʒ�ۿ����| �պ���������| �����պ��þ�| �������İ���Ƶ| ������Ʒ��Ů��վ| ŷ����Ʒ��һҳ| ���޹�����Ʒ123| ������Ʒ������Ů���߹ۿ�| �þð�av��Ӱ| ����������Ʒ�����˵�����| ��������av��վ| �����ۺ�ɫ�㽶��Ʒ| ŷ���ۺ�һ����һҳ| ������ҹ�þþ�ӰԺ����| ŷ�պ�һ����������| һ����Ʒ����| �Ļ�Ӱ������������߹ۿ�һ����������| ������Ʒ��Ƶ��ѹۿ�www| �����ղ����޾�Ʒ| ɫ����av��վ���þ�Ʒ| �þù�����Ʒ����| ���ھ�ƷС��Ƶ| ����һ��������Ʒ����| �����պ����߾�Ʒav| ��ģ��һ����������| �����ۺ�������Ļ68ҳ| ŷ������ŷ��������������| ŷ������������ѹۿ�| ������Ʒ��Ƶ������վ| �������һ����Ƶ�ۿ����| 91��Ʒ�����Բ�����| ŷ������һ����������| �պ�av����һ����������| ������ҹ��Ʒ�þ�| ���߹ۿ�һ��������������| ����һ�������������ձ�| ����ݹ�����Ʒ| ������Ů�ǿ���ھþþ�| �þþ�ŷ��һ������| �������߲�����Ʒ| �������޶���| �����ձ�������岻��| ŷ�������ۺ�����һ����| ������ȤƬ���߹ۿ����| ŷ��������ˮ��Ƶ| ������Ʒ��Ƶyy9099| ŷ���ۺϵ�һҳ| �����ۺϵ�һҳ| 99������Ʒһ������| ������ѿ�����վ| ����һ����ҹ����| ŷ��xxxx�����ִ��ֳ���Ʒ| ŷ�������ۺ�ɫ�ۺ�žž����| ɫ�ۺϾþþ�Ʒ���޹��� | �þ��������| �ձ���ɫ�ۺϾþ�ӰԺ| ��Ʒŷ��һ�����������þþ�| ����ŷ���պ��ۺϾ�Ʒ����| ������Ʒ�����ۺ�����ҹҹ| ŷ�����ް��������ۺ�| ������Ʒһ�����������þ�| ������Ѿþþþþþþþþ�| ��������Ƶ������ѹۿ���Ӱ| ŷ���պ�һ��������Ƶ| ����ŷ��һ������| ����žžav| 91av���߲�����Ƶ| �ձ�������a��Ʒ| 91av��Ƶ���߲���| ŷ��������Ļ��һҳ| �ձ��������߹ۿ�| 91av������Ƶ| 91��Ʒ����һ��| ŷ��������������Ƶ| ŷ���������߹ۿ�| 91��ɫ������Ƶ| ����ŷ��������Ļ| ���������þþ�Ʒ| �������޾�Ʒ���ھþ�| ������ɫ91| 91��Ƶ�������| ����91��Ʒ��Ƶ���߹ۿ�| �ۺϲپþþ�| 97�þþ�Ʒ����������| ������Ʒ��Ƶ����| ������Ļ�պ���Ʒ�þ�| ���������Ƶa| ��Ʒ��������˳ɵ�Ӱ���߹�... ��Ʒ������Ѿþþþþü�� | 57pao��Ʒ| ����999��Ʒ��Ƶ| �������߾�Ʒһ��| ������Ϣ���е�ŷ��| �ձ��������߲���| ��ҹ��Ʒ��Ƶ����| ����һ������������| �������˾�Ʒ����| ����һ��������������| ���˾�Ʒһ������������Ӱ���| ������Ʒ�������޾�Ʒ������15| ����һ������������Ʒ���߹ۿ�| �����������av| ��ģҶͩ������Ʒһ��| �ղ���Ʒ99�þþþþ�| ��re99�þþ�Ʒ����99��| ����һ��ӰԺ| ��vһ����������| ����av���һ��������Ļ| �þ�Ӱ�����ķ���av| ������Ů��Ʒ��ѵ�Ӱ| �������˾�Ʒ�þþ�| ������Ʒ��ţӰԺ���߹ۿ�| ������Ʒһ��������ѿ�| 97������Ƶ�ۿ�| 91��Ѱ���վ���߹ۿ�| ���ھ��þþþþþþþ���| 91��Ʒ��������þþþþ�91| ŷ���պ���Ʒһ��| ����һ���������| ������Ʒ�����ۿ�| ����������������| ŷ��һ���������������| ����ӰԺɫ���߹ۿ����| ŷ������Ƶ����| 91��Ʒ�þþþþþþþ�| ŷ�����޹�����Ƶ| �����ۺ���������| ���޺�������| 91��Ʒ��ɫ| �պ�����þ�| �������˾�Ʒav����| ����ӰԺһ����������| �鶹�þþ�9�Դ�Ƭ| ������Ʒ�þ�����7777| ������Ʒ������Ƶ| �þþþþþù�����Ʒ| ������Ʒ������Ƶ| ����91��Ʒ�������߲���| ��Ʒ����a���鶹| 91��Ƶ-88av| 18�þþþþ�| ����һ������������Ʒ��Ƶ| �ձ�һ����������������Ƶ| �������˾�Ʒ| �����պ���Ʒ�þ�| ������Ʒ��ݾþþþø���99| ������Ʒ�������߹ۿ�| ������Ʒ��������ŷ������| ����һ��������Ӱ���߹ۿ�| 2018�պ�������Ļ| ŷ������ɫ����ݺ�yyy| 91��Ʒ�þþþ�| �պ����������Ʒ| ���˼�����Ƶ����| �Ⱦþ�����ֻ�о�Ʒ| ɫ����av��վ���þ�Ʒ| ������Ʒ�������߹ۿ�| ŷ���պ�������Ʒһ������| ���ձ�����һ�����������ۿ�| 97�������߹ۿ�| ������Ʒŷ������777777| ������Ʒ������ʥ������һ��| ������Ʒ�þþþþþ�СΨ����| �þþþþ����޾�Ʒ| ŷ�������ս���Ƭ| ������Ʒ�鶹va���߲���| ������Ʒ��ž��������ѹۿ�| ���˻�ɫav�������| ������Դ��Ƶ��վ���| ŷ��һ�����߲���| �պ�av123| juliaһ���������ľþ�94| ������Ʒ��ģ��߶�˽��| ������Ƶһ����ѹۿ�| ��������Ʒһ������| ŷ��������Ƶa| ������Ʒvideosex��ŷ��| ���ھ�Ʒ�þþþþ�������Ļ| ��������jvid���߲���| �ձ�����һ��| ����97���˳���caoprom| ��Ƶһ���������߹ۿ�| ����ŷ���պ�������Ļ| ������Ʒ�߳�����| 91��Ʒ��ѿ�| ����Ů��Ʒ��Ƶ��վ���| 91ɫ���߹ۿ�| �þþ�������þþ�| ŷ��һ������| ����������ѹۿ�| 99�ž���Ƶ| 91�þþ�һ�߶�������Ʒ��| ���������պ�ŷ��| ��������³³�����Ƶa| 91�þþ�Ʒ����91�þ���ɫ| ������Ʒ�������߹ۿ�| ŷ������xxxx�����ͽ�| 97������Ʒ����ˬ������| ����һ����������������Ƶ| 99�þþþ�Ʒ��ѹۿ����� | ����Ӱ�Ӿž�ӰԺ���߹ۿ�| �պ���Ʒ������һ��| 99�þ���ɫ��| ��Ʒ����һ��������������������| ������Ʒ��Ƶһ����ģ˽��| ������������Ƭ��ѿ�С˵| ����������������ˬŷ��| 2019������Ʒ��Ƶ| 91�������������Ƶ| �����������| ŷ�����޾�Ʒ�պ�| 91ӰԺ������ѹۿ���Ƶ| ����91ɫ�������| ŷ����Ʒ��Ʒ��Ʒ��Ʒ���| ��������ž��Ʒ��Ƶ�����| ŷ���պ���Ƭһ����������| ������Ů91������| ���޹�����ƷëƬ| �����ۺ���Ƶ��վ| 97���������˹������߹ۿ�| �������ʾ�Ʒ��Ƶ| ����������Ƶ�պ�ŷ��| ������Ʒ�þþþþþþþþ����� | �������һ������������Ѳ���| �þ�����һ��| �þþþù�����Ʒ�����վ| ������Ʒ�����Ƶxxxx| 999�ձ���Ƶ| ������Ʒ�ǿ�����| �������˳��ۺϳ�����| ���ݽ�ŷ����վ���| 51ɫŷ��Ƭ��Ƶ���߹ۿ�| ����һ�����޶���| ���ھ�Ʒ�þþþþ�������Ļ| ŷ��������Ƶ��ѹۿ�| ������Ѿþþþþþþþþ�| �ݺ�ɫ����ݺ�ɫ�ۺϾ�| �����ձ�ŷ������| ������Ʒ�þþþþþþþ���| ���޵�һ����| 91�鶹������Ʒ| ŷ��������Ƶһ������| �ÿ����պ���Ʒ��Ƶ����| һ��һ���þ�a�þ��ۺϾ�Ʒ| һ����Ƶ������Ƶ| 3d��Ʒh����žžһ������| լ������99������Ʒ�ۿ����| ������Ʒһ�����������þ�| ŷ����͹һ������������Ƶ| ���������Ƭ��Ƶ����| ���޾�Ʒ�����ۺϵ�һҳ| ����4444һ����������| ���޹���һ�������������߲� | 18��ŷ��xxx��������| 91������Ƶ����| �ձ����߲��Ų���| www�պ�av| ������Ʒ�þþþþ�һ������| �������߲���һ������| ��������jvid���߲���| ���޳���av����| ������Ѿþ�av| �ձ�������a��Ʒ| ŷ�������պ�һ������| 9a���Ҿþþþþ����| ������Ʒ����þþ�| �þþþù�����Ƶ| ���޹���һ������| �žžžž�Ʒ| ���˹�����Ʒ�����Ƶ| ������Ʒigao��Ƶ| ������Ʒһ�������þ�| ����91�ȱ�ts��������| ³³�ݺݺ�7777һ������| �ձ��������߹ۿ�| �þ�av���һ��| ����һ��������������a��| ����ŷ��һ���������������и�| 97���˾�Ʒ��Ƶ���߹ۿ�| �ձ����߹ۿ�����| һ������������Ƶ| �ձ�һ����Ƶ���߲���| ������Ʒ�þþþ�av���| ���ھ�Ʒģ��av˽�����߹ۿ�| ����1988��ѹۿ�ȫ��| 91ɫ��Ʒ��Ƶ����| ����͵��99| �ձ���Ʒva���߹ۿ�| 4438ȫ���������| ����ivһ����������| ��ŷ�����߿�Ƭa��ѹۿ� | �������Բ��ľþþþþ���| ����3d��Ʒһ����������| �й�����������Ƶ| 91��Ʒ�þþþþ�| ������Ʒ69av| ��ŷ��.com| �պ�av��Ӱ�ֻ�����| ŷ��1oһ11sex��hdhd| ������Ʒ�þþþ�999| ����hƬ���߲��������վ| ����ŷ��һ����| ������Ʒ��Ƶר��| ŷ��������Ƶ���߹ۿ�| 91�㽶���޾�Ʒ| ŷ���������ڵ�| ������Ʒ�þù����������绰ϵ�� | 97ɫ���߹ۿ�| ��������av��վ| ���޾�Ʒһ����������av| ��������һ����������| ��Ʒ����ղ�һ��һ���������| ������ƷëƬvaһ����������| �ձ��ձ���Ʒ�������| ŷ�����鰴Ħ����| �����ۺϹ�����Ʒ| ���޾�Ʒ����| ���ھ�Ʒ400�����¼���| ����3d����һ����������91| ��ҹ��Ʒ�þþþþþ�99�� | ŷ������þþ�| ����һ��������Ӱ| ŷ����Ƭ��ѹۿ�| ����91aaa| ������Ʒŷ��һ������| һ�����������Ҳ���| 91��ѿ�Ƭ��վ| ŷ�������պ�һ���������߹ۿ�| 2025������Ʒ��Ƶ| ɫ��������Ƶ| ������Ʒ�žžþþþþþ�| 91��Ƶ������ѹۿ�| ��ҹ��Ƶ�þþ�| ���˼�����ƵС˵�������| ��Ѿþ�99��Ʒ������| �����պ�����������Ļ����| 97��Ƶ���߹ۿ�����| ɫ����ݺ�һ����������| ������Ʒһ�������������߹�| ������Ʒ88a��| av�����ۺ���| �㶮����ַһ����������| һ��������Ʒ����| ����xxxxx��| ����ŷ����Ӱ���߹ۿ�| �������һ���������������ܹۿ� | ����һ��������Ļ���߹ۿ�| ŷ��������Ƶ���߹ۿ�| ���ëƬһ�����������þþ�| 91��ý������ѹۿ�| ����91���߲��ž�Ʒ91| ����91��Ʒ�þþþþþ�| �þþ��ۺ�����91�þ�98| ������Ƶһ������| ������Ʒ�þþþþþþþ�ktv | ��������a���޾�Ʒ| ����ŷ��ŷ�����߹ۿ�| ŷ��һ������| ŷ��Ұ�����еĴ���K| ���޾�Ʒ����þþþþ�����91| �þ��ۺϾ�ɫŷ���ݺ�| 99��Ƶ������Ʒ��ѹۿ�| ��������һ����| ������Ʒ��Ƶһ����ģ˽��| ������ҹ��Ʒһ������| ������Ʒ����av���߲���| 97��Ƶ���߹ۿ�����| �þþþþù�����Ʒ| ɫ�ۺ������ۺ�������������| �þ����˾ž�| ��������ɫ�ۺ�| ��ҹ��Ʒ�þþþþþð�Ƥ��| ����ֻ�о�Ʒ66| ���¹�����Ʒ�þ�| �þþþþ��ۺ�������| 57pao���˹����������| ŷ������һ������| ŷ����Ʒ������Ʒ�պ���Ʒ| ������Ʒŷ���þ�| 91��ý��Ƶ���| ������Ƶŷ��һ��| ŷ���������ݶ�����Ʒ| ����ɫ69��Ƶ���߹ۿ�| 91��Ʒ����ɳ��| ������Ʒ��������| ������Ʒһ���þþ�| ������Դav| �ձ��������߲���| ����ŷ���ۺ�һ��| �þ�ɬɬ��վ| ��������av������ѹۿ�| 97��Ʒ����97�þþþþ����| �պ�һ����������| �þþþþþþð�| ���޾�Ʒ����| �ձ���ʦ69xxx| һ�������������߹ۿ�| ŷ������Ƶ�þþ�| ���޳���18| �þþþþ��ۺ�������| ������Ʒ��������| 91��Ʒ��������þþþþ�����| 456����ӰԺ| 97���ô����㽶��Ʒ��Ƶ| ��ҹ��Ʒһ������������Ƶ��ѿ�| ŷ������a��ŷ���ؼ�arȫ��| 91����������Ļ| ��������av����| ŷ��һ����������������ѹۿ� | 51��͵�Բ�һ��������������Դ| ����һ��������������a��| ���޳���һ����������| �������徫Ʒһ������| �þþþþ���ַ| ������Ʒ�žžþþþþþ�| ���վ�Ʒ������Ļ| �ձ����޵���| ��������һ����������| �����ۺ�ɫav| ��Ʒ��������þþþþ�108| ��ɫһ����������avƬ| ���ڲ���һ��| ��������ɬɬɬ��Ƶ���߹ۿ�| ����999��Ʒ�þþ�ӰƬ����| �����ۺϹ�����Ʒ| ������Ʒ��Ƶ����| ������Ʒ��Ƶ��ַ| �þ��ۺϺݺ��ۺϾþ������| ������Ʒ�þþ�Ʒ����| ������Ʒ�þþþþ�av���غ��| ��������һ������| ����ŷ��һ��������������ʪ����| ������Ѹ�������| �������һ������| ŷ��������Ļ���߹ۿ�| �������˾�Ʒ��| ����žž��ѿ�| ���޳��˵�һ| ŷ�����龫Ʒ�þþþþ����ӡ��| �ձ�һ������������Ƶ| ��������69�߳�| 91�þþ�Ʒ����91�þ�| ����91��Ʒ�߳��׽���ˮ| ŷ�������պ�ͼƬ| ŷ������Ժһ����������| ���������ۺ�ɫ| 99�þþ�Ʒ����һ������ëƬ| 97����������Ƶ| �ձ���Ѹ���һ��| 99��Ƶ������ѹۿ�| ����va�þþ�������| ���߾�Ʒ����һ������| �����ۺ�avӰ��| 97��Ʒһ��������Ƶ���߹ۿ�| ���˾þ�һ����������| ŷ����������þ��ۺ�| ������Ʒ���þþþþþ�| �㶮����Ƶ����һ������| ���˻�ɫ����Ƭ| ��Ʒŷ������| ������Ʒ͵��һ������ | �պ���Ʒһ����������ɫ͵͵| ������Ʒ�������| 91av���߿�| ����һ��������Ƶ| ������Ʒһ��������������| ŷ������www| ������Ƶ���߶���| ŷ���þþþþ�| 99������Ʒ�þþþ���ʦ| 91��Ʒ�����žžžþþ�����| �պ�����һ���þ�| �������߹ۿ���Ƶ��վ| ��Ʒ����һ��������������������| �þ��ۺ�ëƬ| �������˾�Ʒ���߲���| ����ŷ������һ������| �þþþþ�91| ������Ƶ999| 97���߿���ѹۿ���Ƶ���߹ۿ�| ����free��xxxx��ʿ�׽�| �����׾�Ʒһ������������Ƶ�и�| ��������ŷ����ʦ˿��| ��ɫһ����������avƬ| ������Ʒ91һ��| ���˸������߹ۿ�| ŷ��������Ƶ����| ����Ů��ķ���������| �鶹��Ʒ��ý��Ƶ| �õ�ɫŷ��һ������������Ƶ| 91��Ʒ�þþþþþþþþ�| �պ����ߵ���| �������߹ۿ�����| ����91��Ʒ�߳��׽���ˮ| �պ�ůů������Ƶ| �������ֱ��live| ������Ʒ99�þþþþþþ�| ŷ��������Ƶһ��| �þ�һ��������Ʒ| 99�þ����˾�ƷӰԺ| ������Ʒ�þù�����Ʒ| ������Ʒ�㽶����| 2014���޾�Ʒ| �������˸߳���ѹۿ���Ʒ| �������߾þþ�| 555www������| 91���˸�������| ŷ������������Ļ| �������������Ƶ��ַ| ��������һ��������������| �þ�һ����������ŷ������|