本發明公開了一種含樹枝狀聚酰胺?胺基團的高度超支化陽離子多糖衍生物及其制備方法和應用。所述含樹枝狀聚酰胺?胺基團的高度超支化陽離子多糖衍生物的結構式如式（I）所示；本發明通過一種高效的疊氮?炔點擊反應方法選擇性地將樹枝狀大分子聚酰胺?胺（PAMAM D3或D4）偶聯到超支化多糖鏈上，合成高度超支化陽離子多糖衍生物。本發明反應條件溫和同時反應效率高、具有選擇性。本發明制備的含樹枝狀聚酰胺?胺基團陽離子多糖衍生物具有高度超支化結構的特點，能較好地與siRNA形成正電性的納米復合物，有利于攜帶siRNA進入細胞，提高其對基因的轉染效率，可望用作一種基因載體，具有較大的應用前景。