本發明屬于醫用水凝膠材料制備技術領域，具體涉及一種天然酪蛋白多孔水凝膠材料及其制備方法與應用。本發明首先利用酪蛋白的自乳化特性制備水包油型高內相乳液，再利用1?(3?二甲氨基丙基)?3?乙基碳二亞胺鹽酸鹽和N?羥基琥珀酰亞胺催化酪蛋白的羧基和氨基發生酰胺化反應而使連續相內的酪蛋白交聯形成三維網絡結構，然后經除雜制得天然酪蛋白多孔水凝膠材料，該材料具有連通孔、孔徑分布為5～120μm且孔隙率大于75％。本發明制得的多孔水凝膠不僅生物相容性好、可降解，而且其孔徑及孔隙率易于調控，特別適合用作生物組織工程細胞支架材料。